愛帕琳肽12(AP12)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

愛帕琳肽12(AP12)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

ELISA簡(jiǎn)介
ELISA原理

隨著酶標(biāo)記術(shù)的發(fā)展，將抗體與酶連接來提高其特異性和靈敏度變得十分流行。1971年瑞典學(xué)者Engvall和Perlmann，荷蘭學(xué)者Van Weeman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，稱為酶連免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）。ELISA已被證明在蛋白與核酸檢測(cè)中十分有用的一種技術(shù)。

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏度。

ELISA的類型

ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三分必要的試劑：⑴固相的抗原或抗體，即“免疫吸附劑"(immunosorbent)；⑵酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為“酶連物"、“結(jié)合物"(conjugate)；⑶酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。

絕大多數(shù)ELISA使用以下幾種策略：

1. 間接ELISA（Indirect ELISA）: 用于篩檢抗體（抗特定抗原成分的特異性抗體）。此法是測(cè)定抗體常用的方法。

2. 夾心ELISA（Sandwich ELISA）: 用于檢測(cè)目的抗原的量。其優(yōu)點(diǎn)是避免了對(duì)特異性抗體的直接標(biāo)記，但增加了操作步驟和測(cè)定時(shí)間。

3. 競(jìng)爭(zhēng)ELISA（Competitive ELISA）: 用于確定抗原特異性或待檢標(biāo)本中含交叉反應(yīng)成分時(shí)為了提高實(shí)驗(yàn)的特異性而使用的一種方法。根據(jù)標(biāo)記抗原與同種未標(biāo)記待測(cè)抗原與抗體間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的原理，主要用于測(cè)定小分子抗原。

4. ABS-ELISA法，ABS為親和素(avidin）生物素(biotin)系統(tǒng)(system)的略語。親和素是一種糖蛋白，分子量60000，每個(gè)分子由4個(gè)能和生物素結(jié)合的亞基組成。