發(fā)布時(shí)間： 2022-07-07 點(diǎn)擊次數(shù)： 554次
小鼠瘦素檢測(cè)試劑盒是用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
小鼠瘦素檢測(cè)試劑盒的操作流程：
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
(3)洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
(6)洗板，同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
(9)洗板，同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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